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　　ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線最高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，較呈直線的部分是理想的檢測區(qū)域。
 

　　E2檢測ELISA試劑盒變質(zhì)的因素：
 

　　操作因素：
 

　　試劑盒操作步驟雜亂，操作不當(dāng)將引起較大的差錯。加樣、溫育、洗刷、顯色、比色。
 

　　樣本因素：
 

　　標(biāo)本攪擾要素包含內(nèi)源性攪擾要素和外源性攪擾要素，前者包含類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、本身抗體、等，后者包含標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時刻過長、標(biāo)本凝結(jié)不全、冷凍標(biāo)本的重復(fù)凍融等。
 

　　試劑因素：
 

　　不同批次的ELISA試劑在制作進(jìn)程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測成果也存在差異，因而必須挑選和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一規(guī)范可以防止因試劑批號改動而從頭建立質(zhì)控體系及從頭評估試劑的雜亂進(jìn)程，并且能夠保證成果的穩(wěn)定性；關(guān)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，防止重復(fù)凍融造成試劑的失效。